Les Métallo-beta-lactamases -recherche de souches bactériennes productrices -essais d’inhibition de l’activité enzymatique relative par trois flavonoïdes commerciaux et deux extraits de terminalia chebula

Abstract

Quatre extraits sont préparés : deux extraits, l’un aqueux et l’autre méthanolique à partir de fruits secs de Terminalia chebula et deux extraits semi-purifiés de betalactamases, l’un à partir d’une souche Acinetobacter baumannii et l’autre à partir d’une souche Pseudomonas aeruginosa (isolats cliniques) identifiées, parmi huit autres, par le test CDT comme productrices de métallo et de sérine-betalactamases, dans l’ordre. Les analyses quantitatives et qualitatives montrent que les deux premiers sont riches en polyphénols (513.094±3.061 et 496±2.856 µg GAE/mg, respectivement) et en flavonoïdes (39.866±0.469 and 37.261±0.272 µg QE /mg, respectivement). Les seconds sont riches en protéines (7.9 et 8.9 mg/ml d’extrait, respectivement). L’extrait semi-purifié de betalactamases à partir de A.baumannii hydrolyse l’imipenème (KM= 59.56 µM, Vm = 47.62 µmol/mg/min), son activité enzymatique est sensible à l’EDTA (IC50 = 3.98mM), hydrolyse beaucoup plus la céphaloridine que la benzylpenicilline; la ou les betalactamases y contenues peuvent être donc du type MBL classe 3c. Il est inhibé compétitivement par la morine, et par les extraits méthanolique et aqueux de fruits secs de T.chebula (IC50 = 23.28 µM, 18.45 et 19.68 µg/ml, respectivement) et non compétitivement par la myrécitine et la rutine (IC50 = 26.39 et 39.71 µM, respectivement). Le second extrait à partir de P.aeruginosa n’hydrolyse pas l’imipenème, son activité enzymatique est insensible à l’acide clavulanique, à l’EDTA et au NaCl et hydrolyse beaucoup plus la céphaloridine que le benzylpenicilline. La ou les betalactamases y contenues peuvent être du type SBL classe C. Il est inhibé compétitivement par la morine, la rutine et les extraits méthanolique et aqueux de fruits secs de T.chebula (IC50 = 30, 21.03 µM, 7.04 et 12.07 µg/ml, respectivement) et non compétitivement par la myrécitine (IC50 = 27.10 µM). La comparaison des IC50 des trois flavonoïdes a ceux des extraits méthanolique et aqueux de fruits secs de T.chebula supposent que ceux-ci sont riches en flavonoïdes de structure beaucoup plus proche à celle de la morine. Le test de mise en évidence d’effets potentialisateur ou antagoniste montre que l’extrait méthanolique potentialise relativement l’effet de l’imipenème sur la croissance de A.baumannii.