Synhese et caracterisation de resines fonctionnalisees et etude de leur affinite Vis-à-vis de l'albumine HSA

Abstract

Nous avons étudié les paramètres qui conditionnent la purification d’une protéine en chromatographie d’affinité. Par la suite, nous avons effectué la projection de cette étude sur des copolymères que nous utilisons dans la préparation de phases stationnaires. L’objet de ce travail était donc le développement des supports sélectifs pour l’analyse d’une protéine cible qui est la HSA. Dans ce contexte, nous avons entrepris la synthèse de polymères fonctionnels insolubles susceptibles d’interagir spécifiquement avec la HSA et, de ce fait, utilisables pour sa purification. La synthèse ayant conduit à l’obtention de supports dérivés de polymères réticulés, dotés d’excellentes propriétés, pouvant être utilisés comme phases stationnaires en chromatographie d’affinité au stade analytique. Parallèlement à cela l‘étude contribue à élucider le mécanisme régissant les interactions entre la HSA et la surface du polymère. Pour chaque étape, nous avons étudié l’influence de certains paramètres afin de mettre en évidence leur rôle et de les optimiser dans le but de préparer des résines ayant des propriétés déterminées. Les différentes méthodes de caractérisation ont permis d’établir pour cette étape de synthèse, et par les résultats concordants, l’obtention effective des fonctions chimiques prévues sur la chaîne de polymère. La substitution a conduit à disposer d’un polymère dérivé du polystyrène réticulé comportant à des taux assez importants, des groupements SO3H, aminoacides et colorant. Les différentes méthodes de caractérisation ont permis d’établir, dans les différentes étapes de synthèse, l’obtention des fonctions désirées : -SO3H, -NO2, -NH2 et --COL-NH-, sur les molécules de polystyrène réticulé et des molécules d’aminoacides sur les molécules d’agarose réticulé également. Les groupements sont majoritairement greffés en position para sur les noyaux aromatiques et sont uniformément répartis à travers toute la masse du copolymère. L’étape intermédiaire d’hydrolyse qui suit l’étape de nitration a permis l’obtention de taux de substitution en groupements actifs élevés. Ce qui conduit à des taux améliorés en groupements colorant et acides aminés. Les analyses quantitatives ont confirmé ces taux. Il est à noter cependant que ces taux sont surestimés en raison de la présence de groupements parasites formés durant les étapes antérieures. Nous obtenons en fin de réaction des résines mixtes. Nous pouvons ainsi dire que l’Albumine présente une bonne affinité vis à vis des résines préparées, mais cette affinité diffère d’une surface à une autre. Les isothermes d’adsorption à 25°C de l’albumine sur les matériaux à propriétés adsorbantes sont de type Langmuir. Ces résultats suggèrent que l’adsorption est due à la présence de sites actifs caractérisés par la nature des fonctions qui les constituent.