BRCA1 et réponse aux agents anticancéreux dans les hépatocarcinomes

Abstract

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est une des tumeurs malignes la plus meurtrière et pour laquelle les options thérapeutiques se heurtent à une chimiorésistance associée aux gènes de réparation de l’ADN. Il est établi à travers nombreuses études que le gène BRCA1, impliqué dans la réparation, était surexprimé dans les CHCs. Notre attention a été focalisée sur l’étude du rôle potentiel de BRCA1 dans la chimiorésistance des CHCs. Dans la première partie de ce travail, Le profil d’expression de BRCA1 dans des lignées d’hépatocarcinomes a été évalué par SDS PAGE et western blot en présence d’anticorps spécifiques. La sensibilité de ces lignées de CHC aux agents pontant l’ADN et largement utilisés en chimiothérapie tels que le Cisplatine, la Mitomycin C (MMC), et le Melphalan a été évalué, dans un deuxième temps, par le test de viabilité cellulaire après traitement par des concentrations croissantes des différentes drogues et le calcule de la concentration inhibitrice de 50 % de survie (IC50). La sur-expression de BRCA1 dans certaines lignées et leurs résistances aux drogues indique son implication dans la résistance des CHCs aux traitements. Dans la troisième partie du travail le rôle fonctionnel de BRCA1 dans la réponse à la Mitomycice C a été évalué par la manipulation de son expression. Une sur-expression de BRCA1 a été induite par la transfection à l’aide de vecteur pCMVmyc-BRCA1dans la lignée épithéliale HepG2 sensible à la base à la Mitomycine C. D’autre part, une répression de l’expression de BRCA1 par inter-férence a été induite dans la lignée mésenchymateuse SNU449 hyper-résistante. La réponse des cellules transfectées à des concentrations croissantes de Mitomycine C a été évaluée par le test de viabilité. Les résultats ont démontrés que la surexpression de BRCA1 dans les cellules de la lignée HepG2 leurs confère une résistance à la MMC. Par contre la répression de l’expression de BRCA1 sensibilise les cellules de la lignée SNU449 à la MMC. Afin de mieux comprendre l’origine de la sensibilisation de la lignée SNU449, le cycle cellulaire des cellules de SNU449 transfectées par siRNA-BRCA1 et traitées par 200nM de Mitomycine C a été analysé par cytométrie de flux. Les changements du cycle cellulaire indiquaient que la sensibilisation de la lignée SNU449 est due à l’arrêt du cycle cellulaire en phase 4N suite à la répression de BRCA1. De ce fait, notre étude montre que l’inactivation de BRCA1 est suffisante pour la sensibilisation des CHC à la chimiothérapie.